Содержание

• направления
• Восстановление столбца
• чаевые
• предупреждение
• Что вам нужно

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) является распространенным методом лабораторного анализа, при котором образец разделяется на его химические компоненты, когда он проходит через колонку. Эта колонка заполнена пористым материалом, обычно силикагелем. Стандартная колонка с обращенной фазой, такая как C8, иногда может забиться или стать загрязненной. Эти столбцы могут быть получены с использованием очень простых методов.

направления

Правильный растворитель может восстановить грязную колонку (Jupiterimages / liquidlibrary / Getty Images)

Восстановление столбца

1. Отключите столбец и измените его положение, чтобы подвижная фаза теперь входила через то, что обычно является выходом столбца. Присоедините выход к другому концу колонки (который был первоначальной записью) и дайте ему стечь в слив.

2. Насос серии растворителей в порядке уменьшения полярности. Рекомендуемая базовая серия - начать с метанола, затем переключиться на ацетонитрил, затем ацетонитрил / изопропанол (75:25), изопропанол, метиленхлорид и гексан. Если подвижная фаза, которая находилась в колонне, была абсорбирующей, рекомендуется проход с водой перед метанолом. Достаточно расхода от одного до двух миллилитров в минуту, и необходимо прокачать примерно десять объемных колонок каждого растворителя. Столбец объема является внутренним пространством столбца и рассчитывается по формуле (0,7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), где DI - внутренний диаметр столбца, а L - длина.

   
   

3. Прокачайте еще десять объемов изопропанола через колонку, чтобы подготовить его для использования с исходной подвижной фазой. Если исходная подвижная фаза была смягчена, также прокачайте воду через колонку после изопропанола, прежде чем вернуться к исходной подвижной фазе.

4. Отключите колонку, переверните ее и снова включите, чтобы она оказалась в исходном положении (чтобы подвижная фаза вошла в правую часть колонны). Подключите выход динамика к детектору.

чаевые

• Если этот процесс не очищает колонку полностью, можно использовать смесь 50:50 диметилсульфоксида (ДМСО) и диметилформамида (ДМФА). Для остатков белков и ионов металлов могут потребоваться другие типы растворителей, такие как ионы-щадящие реагенты или раствор этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА).

предупреждение

• В некоторых приборах позвоночник будет иметь грубое металлическое сито на входе. В этом случае возврат столбца позволит стационарной фазе покинуть столбец, и это не рекомендуется. Проконсультируйтесь с вашим дилером, если вы не уверены.
• Растворитель, используемый в этом процессе, потенциально токсичен при проглатывании и вдыхании. Используйте обычные лабораторные меры предосторожности при обращении.

Что вам нужно

• Устройство ВЭЖХ
• вода
• метанол
• ацетонитрил
• изопропиловый спирт
• Метиленхлорид
• гексан