Содержание
Холодный спирт используется для отделения ДНК от растворов на водной основе, что позволяет очищать ее для последующего генетического тестирования. Добавление спирта в раствор, содержащий ДНК, - это простой способ сделать его чистым при более низких температурах и замедлить ферменты, которые его разлагают, что дает лучшие результаты экстракции.
Разрушая клеточные стенки
Процедуры экстракции для получения чистой ДНК должны избавить от всех молекулярных и химических компонентов ткани, из которой ДНК извлекается. Первые шаги включают разрушение клеточных стенок. Это можно сделать с помощью различных химических агентов, которые едкие для клеточных мембран, но не повреждают ДНК. Клетки также могут быть обработаны ультразвуком, гомогенизированы или размолоты для разрушения мембран.
Удаление липидов
Как только клеточные стенки разрушены, добавляется моющее средство, чтобы избавиться от жиров и масел, которые составляют клеточные мембраны. Моющие средства вызывают растворение масел и жиров в растворе.
Удаление белков
Белки и ферменты могут быть переварены путем добавления протеазы в раствор. Протеазы расщепляют белки на мелкие пептиды и аминокислоты.
Осаждение ДНК
Добавление ледяного спирта в раствор приведет к осаждению и агрегации ДНК. Генетический материал может быть собран путем центрифугирования образца и декантации жидкого слоя. Он должен существовать в виде небольшого осадка на дне центрифужной пробирки.
Очищающая ДНК
ДНК можно промыть путем повторного суспендирования в холодном спиртовом растворе и повторно центрифугировать несколько раз, чтобы получить очень чистый образец. Типичные используемые спирты включают этанол и изопропанол. Этот процесс оставляет очень чистый образец в строгих тестах.
